Россия
При изучении микробиологического спектра возбудителей желудочно-кишечной патологии у животных выделяют бактерии семейства Enterobacteriaceae, ряд которых вызывают такие болезни, как колибактериоз, сальмонеллез, иерсиниоз, протейную инфекцию и другие. На базе БУ «Омская областная ветеринарная лаборатория» был изучен видовой состав энтеробактерий, выделенных при желудочно-кишечных заболеваниях сельскохозяйственных животных в разных районах Омской области. Культуры выделяли из материала от крупного и мелкого рогатого скота, свиней, лошадей и сельскохозяйственной птицы с заболеваниями ЖКТ. Пробы были отобраны от животных различных возрастных групп, но особое внимание было направлено на изучение микробиоценоза молодняка крупного рогатого скота. В период с 2016 по 2020 г. было выделено 12 видов энтеробактерий, относящихся к 9 родам: Citrobacter, Escherichia, Enterobacter, Hafnia, Klebsiella, Proteus, Salmonella, Shigella и Yersinia. Принадлежность бактерий рода Escherichia к серотипам определяли с помощью диагностических О-колиагглютинирующих сывороток. Энтеропатогенные серотипы эшерихий, выделенные от крупного рогатого скота, составили 64,3 %, от свиней – 58,6 %, у лошадей и мелкого рогатого скота выделяли только единичные патогенные серотипы. Выделенные культуры обладали различной степенью патогенности, которую определяли путем посева на кровяной агар и постановки биопробы на лабораторных животных. Изучена чувствительность культур к антибактериальным препаратам с помощью диско-диффузионного метода (ДДМ). У большинства выделенных культур энтеробактерий установлена чувствительность к гентамицину, левомицетину, ципрофлоксацину и стрептомицину. Значительная часть энтеробактерий проявила резистентность к азитромицину, линкомицину и энрофлоксацину.
сельскохозяйственные животные, желудочно-кишечная патология, энтеробактерии, патогенность, чувствительность к антибиотикам
Введение. Условно-патогенные энтеробактерии являются представителями факультативной микрофлоры толстого кишечника и достаточно часто обнаруживаются в значительном количестве при исследовании проб от клинически здоровых людей и животных [1, 2]. Микроэкологическая система желудочно-кишечного тракта животных подвержена воздействию целого ряда разнообразных неблагоприятных экзогенных (загрязнение кормов, воды, почвы и воздуха) и эндогенных факторов (иммунодефицитные состояния, вызванные заболеваниями вирусной и бактериальной этиологии, нерациональное применение антибактериальных препаратов) и т. д. [3–5]. Зачастую под влиянием различных неблагоприятных факторов условно-патогенная микрофлора практически всегда приобретает патогенные свойства и является причиной нарушения нормоэнтеробиоценоза [6].
В настоящее время одним из наиболее распространенных заболеваний молодняка сельскохозяйственных животных является колибактериоз. Важнейшую информацию о патогенных свойствах эшерихий получают при определении их антигенной структуры. Клетки эшерихий содержат три вида антигенов: О – соматический, К – оболочечный и Н – жгутиковый. У больных телят по структуре антигена установлено более 165 вариантов О-антигена, 55 Н-антигена и 90 вариантов К-антигена. К-антигены обладают адгезивными свойствами, т. е. с их помощью бактерии прикрепляются к эпителиальным клеткам слизистой оболочки кишечника [7, 8].
Нередко наблюдается поражение желудочно-кишечного тракта животных, вызванное протеем. Обнаружение большого количества культур P. vulgaris в воде и кормах свидетельствует об их органическом загрязнении, возникающем при нарушении норм содержания и кормления животных. В результате происходит массовое перезаражение животных патогенной культурой, что влечет за собой фекальное загрязнение объектов животноводства, обеспечивая циркуляцию возбудителей протейной инфекции [9, 10].
Цель исследования – определить видовой спектр энтеробактерий, выделенных у сельскохозяйственных животных с клиническими признаками нарушения функций пищеварительной системы в хозяйствах Омской области.
Объекты и методы. Объектом исследования явились сельскохозяйственные животные и птица, у которых были выделены бактерии семейства Enterobacteriaceae в период с 2016 по 2020 г. Исследования проводили на базе БУ «Омская областная ветеринарная лаборатория» согласно методическим рекомендациям «Методы бактериологического исследования условно-патогенных микроорганизмов в клинической микробиологии» от 19 декабря 1991 г. Материалом для микробиологического исследования служили внутренние органы, абортированные плоды, ректальные смывы и пробы фекалий от животных с желудочно-кишечной патологией.
Идентификацию выделенных культур микроорганизмов проводили классическими микробиологическими методами. Серологическую идентификацию выделенных культур E. coli проводили с помощью агглютинирующих О-коли сывороток в соответствии с рекомендациями от 16 июня 1980 г. Чувствительность микроорганизмов к антибактериальным препаратам определяли с помощью диско-диффузионного метода (ДММ) в соответствии с МУК 4.2.1890-04 «Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам». Патогенность выделенных культур определяли постановкой биопробы на лабораторных животных, а также путем посева на кровяной агар. Подопытным животным внутрибрюшинно вводили 0,5 мл бактериальной суспензии в концентрации 0,5х109 м.т/мл. Контрольным животным вводили 0,5 мл стерильного 0,9%-го физиологического раствора, клиническое наблюдение за зараженными животными осуществляли в течение 5 суток.
Результаты и их обсуждение. По результатам проведенных исследований энтеробактерии чаще выделяли у молодняка крупного рогатого скота, реже у свиней, лошадей, мелкого рогатого скота и птицы различных возрастных групп. Положительные находки энтеробактерий были выявлены в количестве: 804 культуры у крупного рогатого скота, 147 – у свиней, 12 – у лошадей и 12 – у мелкого рогатого скота, (табл. 1).
Таблица 1
Выделение энтеробактерий у животных с патологией ЖКТ
в районах Омской области (2016–2020 гг.)
|
Район |
КРС |
МРС |
Свиньи |
Лошади |
|
Азовский |
72 |
– |
– |
– |
|
Большереченский |
27 |
4 |
2 |
– |
|
Горьковский |
8 |
– |
1 |
– |
|
Исилькульский |
52 |
– |
– |
– |
|
Калачинский |
21 |
– |
2 |
– |
|
Кормиловский |
11 |
– |
10 |
– |
|
Любинский |
39 |
– |
– |
– |
|
Марьяновский |
27 |
3 |
– |
– |
|
Москаленский |
7 |
– |
– |
– |
|
Нововаршавский |
9 |
– |
– |
– |
|
Одесский |
94 |
– |
1 |
– |
|
Оконешниковский |
2 |
– |
– |
1 |
|
Омский |
54 |
1 |
120 |
4 |
|
г. Омск |
7 |
– |
1 |
3 |
|
Павлоградский |
11 |
– |
– |
– |
|
Полтавский |
65 |
2 |
2 |
– |
|
Русско-Полянский |
77 |
– |
– |
– |
|
Седельниковский |
4 |
– |
1 |
2 |
|
Таврический |
152 |
2 |
– |
1 |
|
Тарский |
16 |
– |
3 |
1 |
|
Тюкалинский |
7 |
– |
2 |
– |
|
Черлакский |
30 |
– |
– |
– |
|
Шербакульский |
5 |
– |
– |
– |
|
Итого |
804 |
12 |
147 |
12 |
Значительно меньшее количество проб поступило и было исследовано из хозяйств Знаменского, Называевского, Колосовского, Крутинского, Муромцевского, Нижнеомского, Саргатского районов.
У крупного рогатого скота видовой состав энтеробактерий был представлен 9 родами: Citrobacter, Escherichia, Enterobacter, Hafnia, Klebsiella, Proteus, Salmonella, Shigella и Yersinia.
Среди молодняка крупного рогатого скота за 2016–2020 гг. были исследованы пробы от животных в возрасте от 2–3 дней до 6 месяцев, а также содержимое ЖКТ абортированных плодов. Было выделено 11 видов энтеробактерий (рис. 1). Чаще всего встречались случаи выделения Escherichia coli – 49 % (n=390), из них значительное количество составляли патогенные энтеробактерии (n=251). На втором месте по частоте выделения располагался Proteus vulgaris – 29 % (n=232). Далее Citrobacter freundii – 10 % (n=84), Klebsiella pneumoniae – 6 % (n=46), Proteus mirabilis – 4 % (n=30). Остальные культуры (2 %) составляли Citrobacter diversus, Enterobacter aerogenes, Enterobacter cloaceae, Salmonella dublin, Shigella flexneri и Yersinia enterocolitica.
Рис.1. Видовой состав энтеробактерий, выделенных у КРС с патологией ЖКТ (2016–2020 гг.)
У свиней было выделено 7 видов энтеробактерий, среди которых чаще всего регистрировали Escherichia coli – 51 % (n=75), из них патогенных серотипов 44 культуры. Также выделяли Proteus vulgaris – 24 % (n=36) и Citrobacter freundii – 18 % случаев (n=26). Остальные культуры (7 %) составляли Citrobacter diversus, Enterobacter aerogenes, Klebsiella pneumoniae и Proteus mirabilis (рис. 2).
У лошадей выделяли 4 вида энтеробактерий: Escherichia coli – 67 % (n=8, только патогенные серотипы), а также 2 случая выделения Hafnia alvei и по одному случаю – Citrobacter freundii и Enterobacter cloaceae.
У мелкого рогатого скота в Омской области за данный период выделяли только Escherichia coli (n=12), из них 7 серотипов были патогенными.
Материал от птиц подвергался исследованиям на колибактериоз и сальмонеллез. В качестве патологического материала исследовали трупы, эмбрионы, инкубированное яйцо и помет. Количество положительных находок возбудителей колибактериоза и сальмонеллеза за 2016–2020 гг. приведено в таблице 2.
Рис. 2. Видовой состав энтеробактерий, выделенных у свиней с патологией ЖКТ (2016–2020 гг.)
Таблица 2
Выделение энтеробактерий у птиц (2016–2020 гг.)
|
Возбудитель |
2016 |
2017 |
2018 |
2019 |
2020 |
Итого |
|
Escherichia coli |
127 |
88 |
114 |
125 |
89 |
543 |
|
Salmonella spp. |
2 |
1 |
1 |
– |
– |
4 |
Таким образом, наибольшее количество культур эшерихий от птиц было выделено в 2016 и 2019 гг., всего 543 культуры в период с 2016 по 2020 г. Сальмонеллы выделяли только с 2016 по 2018 г., всего 4 культуры.
Принадлежность эшерихий к энтеропатогенным серотипам определяли с помощью диагностических О-коли сывороток. У крупного рогатого скота наиболее часто регистрировали E.coli следующих серотипов: О8, О78, О20, О86, О141 и О2; у свиней – О26, О8, О33 и О20. Патогенность данных культур определяли путем постановки биопробы, в случае гибели лабораторных животных в течение 5 суток после введения бактериальной суспензии подтверждали этиологическую роль возбудителя в заболевании животных.
В результате проведенных исследований установили, что 59 % культур эшерихий чувствительны к левомицетину, 74 – к ципрофлоксацину, 62 – к стрептомицину и 68 % – к фосфомицину. Большинство культур Proteus spp. чувствительно к перечисленным антибактериальным препаратам, а также к гентамицину. Большая часть культур Citrobacter spp. чувствительна к гентамицину, доксициклину, ципрофлоксацину и стрептомицину, Klebsiella spp. – к гентамицину, доксициклину, тетрациклину, ципрофлоксацину и цефазолину. Выделенные бактерии рода Enterobacter обладали чувствительностью к доксициклину, канамицину, левомицетину, тетрациклину, ципрофлоксацину, стрептомицину, цефуроксиму и пефлоксацину. Наибольшую резистентность энтеробактерии всех родов проявили к азитромицину, линкомицину и энрофлоксацину.
Таким образом, большинство выделенных энтеробактерий чувствительны к гентамицину, левомицетину, ципрофлоксацину и стрептомицину.
Заключение. В период с 2016 по 2020 г. у сельскохозяйственных животных с патологией желудочно-кишечного тракта было выделено 12 видов энтеробактерий. Среди возбудителей желудочно-кишечной патологии наиболее часто выделяли энтеропатогенные серотипы Escherichia coli – 251 культура у крупного рогатого скота, 44 – у свиней, 8 – у лошадей и 7 – у мелкого рогатого скота. Наиболее часто регистрировали серотипы О2, О8, О20, О26, О33, О78, О86 и О141. На втором месте по количеству выделенных культур у животных Proteus vulgaris – 268, на третьем месте по частоте выделения Citrobacter freundii – 111 культур.
По результатам определения чувствительности к антибактериальным препаратам установили, что большинство энтеробактерий чувствительны к гентамицину, левомицетину, ципрофлоксацину и стрептомицину. Резистентность к азитромицину, линкомицину и энрофлоксацину выявили у более 50 % выделенных культур энтеробактерий.
1. Егорова С.А., Забровская А.В., Лавренева И.С. Характеристика микрофлоры при дисбиозе кишечника и способы ее коррекции // Современные средства иммунодиагностики, иммуно- и экстренной профилактики актуальных инфекций: мат-лы науч. конф. с междунар. участием. СПб., 2004. С. 179–181.
2. Макарова М.А., Кафтырева Л.А., Егорова С.А. Этиологическая значимость условно патогенных энтеробактерий при острых кишечных заболеваниях и дисбиотических состояниях кишечника // Инфекция и иммунитет. 2011. Т. 1, № 2. С. 181–184. URL: https:// iimmun.ru/iimm/article/view/45?locale=ru_RU.
3. Грачева Н.М. Дисбактериозы и суперинфекция, причины их возникновения, диагностика, лечение // Лечащий врач. 1999. № 31. С.17–21. URL: https://lvrach.ru/1999/ 01/4527299.
4. Дансарунова О.С. Роль микрофлоры желудочно-кишечного тракта животных в возникновении эндогенных бактериальных инфекций и их коррекция: дис. … канд. ветеринар. наук / Бурят. гос. с.-х. академия. Улан-Удэ, 2017. 175 с.
5. Макавчик С.А. Бактериальные болезни крупного рогатого скота, вызванные полирезистентными микроорганизмами (диагностика, лечение и профилактика): автореф. дис. … д-ра ветеринар. наук / Санкт-Петербург. гос. ун-т ветеринар. медицины. СПб., 2021.
6. Конищева А.С., Плешакова В.И., Лещева Н.А. Микробиом кишечника телят при дисбактериозе // Вестник Омского государственного аграрного университета. 2021. № 3 (43). С. 70–76.
7. Терехов В.И. Этиология и эпизоотология желудочно-кишечных болезней новорожденных телят // Ветеринария сельскохозяйственных животных. 2012. № 1. С. 15.
8. Шевченко А.А. и др. Лабораторная диагностика инфекционных болезней животных. Краснодар, 2008. С. 55–65.
9. Видягина О.С. Изучение протективного эффекта парентеральной и пероральной иммунизации животных против колибактериоза // Аграрные конференции. 2018. № 2(8). С. 1–5. URL: https://elibrary.ru/item. asp?id=35120349.
10. Шепелин А.П., Полосенко О.В. Сравнительный анализ питательных сред для выделения протеев // Бактериология. 2019. Т. 4, № 3. С. 31–37. DOIhttps://doi.org/10.20953/2500-1027-2019-3-31-37. URL: https://elibrary.ru/ item.asp?id=42467908.
