УДК 611.018 Гистология. Гистогенез. Учение о тканях
УДК 616-097 Антигены. Антитела
УДК 618.36 Послед. Плацента (placenta). Детское место
УДК 636.42 Английские породы свиней
УДК 636.48 Породы свиней других частей света (кроме Европы)
Цель исследования – изучение рецептивности плацентарной ткани с применением иммуногистохимических методов исследования. Данная группа диагностических методов позволяет устанавливать патогенез и патоморфологию до явных клинических проявлений с определением маркеров, являющихся важным элементом структуры фетоплацентарного комплекса и его функционирования. Установлено изменение эндотелиальных структур плаценты в виде экспрессивных различий базальной части ворсин хориона и дефекта синцитиокапиллярных мембран и эндотелия капилляров ворсин. В группе животных с высокой ферментативной активностью плацентарной ткани выявлены CD34 – иммунопозитивные структуры в парацентральных зонах ворсин хориона у 87 % особей. Этот факт обуславливает дистрофические процессы в стенках сосудов плаценты и указывает на патоморфологические изменения плацентарного барьера. Экспрессия CD34 иммунопозитивных клеток в эндотелиальном сосудистом слое хориона проведена путем иммуногистохимического исследования в системе проводки и инкубации с антителами по протоколу от производителя, с мышиными моноклональными антителами к CD34 – CD34 Mouse Monoclonal Antibody. Использование предложенных подходов по CD-типированию фетоплацентарного комплекса в зависимости от ферментативной активности плаценты позволит устанавливать нарушения и патологические состояния с целью предотвращения ранних репродуктивных потерь у сельскохозяйственных животных. Выявление характерных условий плацентации с именным рецептивным профилем дает возможность объективно оценить иммуногенные и реактивные возможности новорожденного организма, а также конкретизировать тактику последующих беременностей у продуктивных животных.
рецептивный профиль плаценты, маркер CD34, внутриутробный период развития, плацентарная ферментативность, свиноматки, иммуногистохимия
Введение. Важной особенностью полноценного развития новорожденного молодняка сельскохозяйственных продуктивных животных является взаимоотношение плода и материнского организма с формированием закономерной плацентарной связи [1–3].
Во время беременности материнский организм подвергается влиянию значительного спектра различных определяющих факторов. При этом разная интенсивность и продолжительность их действия вызывают отрицательные сдвиги адаптации фетоплацентарнорго комплекса и могут привести к патологии беременности [4, 5].
Плацентарные условия между материнским организмом и развивающимся плодом образуются на ранних стадиях эмбрионального периода и продолжаются до завершения внутриутробного развития. Изменения, связанные с ростом и развитием плода, сопровождаются существенными функциональными и морфологическими преобразованиями (обменные процессы усложняются, уровень гуморальных компонентов усиливается, клеточные и тканевые процессы претерпевают высокую дифференцировку) [6, 7].
Исследования ученых выявили прямую взаимосвязь уровня жизнеспособности плода с изменениями в плацентарной ткани. Однако изучение рецептивности плацентарной ткани в проведенных исследованиях не отражено.
Выявление характерных условий плацентации с именным рецептивным профилем дает возможность объективно оценить адаптивные возможности новорожденного организма, а также конкретизировать тактику последующих беременностей у животных [8–10].
В современных условиях значительно увеличился интерес к иммуногистохимическим методам исследования у животных. Данная группа диагностических методов позволяет устанавливать патогенез и патоморфологию до явных клинических проявлений с определением маркеров, являющихся важным элементом структуры фетоплацентарного комплекса и его функционирования.
Цель исследования – изучение рецептивности плацентарной ткани свиноматок различной ферментативной активности на основании иммуногистохимических методов исследования.
Объекты и методы. Опыты проводили на базе свиноводческого хозяйства СПК Гущенко Краснодарского края, благополучного по инфекционным и инвазионным заболеваниям. Объектом исследования выступали плаценты 10 свиноматок крупной белой породы. Предметом исследования являлся рецептивный профиль плацентарной ткани свиноматок различной кратности опоросов и плодоношений. В репрезентативную выборку были определены свиноматки с различной ферментативной активностью плацентарной ткани: первая группа с высокой активностью плацентарной карбоксипептидазы (среднее значение 8,48±0,11 ед.) и вторая группа с низкой активностью плацентарной карбоксипептидазы (среднее значение 2,70±0,25 ед.)
Материал фиксировали в 10 %-м буферном растворе формалина. Экспрессию CD34 иммунопозитивных клеток в эндотелиальном сосудистом слое хориона проводили путем иммуногистохимического исследования в системе проводки и инкубации с антителами по протоколу от производителя (Dako – USA), с мышиными моноклональными антителами к CD34 – CD34 Mouse Monoclonal Antibody – фл., конц. 0,5 (мл), с применением промывного буфера ТРИС 20Х кратный для ИГХ + ТВИН20 – 20Х TBS IHC Wash Buffer + Tween 20 – фл. конц. 1000,0 мл.
Результаты и их обсуждение. При проведении иммуногистохимического исследования плацент свиноматок выявлены различия в экспрессивной активности маркера CD34 в ворсинах хориона. Высокая оптическая плотность свидетельствует о патологии эндотелия (рис. 1, 2).
|
|
|
|
Рис. 1. Экспрессия CD34 в хорионе свиноматок группы с активностью плацентарной карбоксипептидазы (ср. значение 8,48±0,11 ед.) |
Рис. 2. Экспрессия CD34 в хорионе свиноматок группы с активностью плацентарной карбоксипептидазы (ср. значение 2,70±0,25 ед.) |
Экспрессия иммунопозитивных структур маркера CD34 определялась в виде окрашенных ядер в коричневый цвет хориальной оболочки.
Различный уровень ферментативной активности плацентарной ткани проявился в изменении уровня экспрессии маркера CD34, отраженного в диаграмме (рис. 3).
Выявление экспрессивных структур маркера CD34 позволяет сделать вывод о важном аспекте изучения иммунорецептивного профиля плацентарной ткани как нового критерия патологического состояния фетоплацентарного комплекса.
Установлено изменение эндотелиальных структур плаценты в виде различного уровня экспрессии базальной части ворсин хориона, из этого делаем вывод о дефекте эндотелия капилляров ворсин. В группе животных с высокой ферментативной активностью плацентарной ткани выявлены CD34 – иммунопозитивные структуры в парацентральных зонах ворсин хориона у 87 % особей с высокой активностью плацентарной карбоксипептидазы (ср. значение 8,48±0,11 ед.). Этот факт обуславливает дистрофические процессы в стенках сосудов плаценты и указывает на патоморфологические изменения плацентарного барьера.
Рис. 3. Площадь экспрессии эндотелиального маркера CD34
в ворсинах хориона свиноматок групп сравнения
Заключение. Использование предложенных подходов по CD-типированию фетоплацентарного комплекса в зависимости от ферментативной активности плаценты позволит устанавливать нарушения и патологические состояния с целью предотвращения ранних репродуктивных потерь у сельскохозяйственных высокопродуктивных животных.
1. Novel pathways for implantation and establishment and maintenance of pregnancy in mammals / F.W. Bazer [et al.] // Mol. Hum. Reprod. 2010. № 16 (3). P.135–152.
2. Immunohistochemical detection of SWC3, CD2, CD3, CD4 and CD8 antigens in paraformaldehyde fixed and paraffin embedded porcine lymphoid tissue / J. Tingstedt [et al.] // Vet. Immunol. Immunopathol. 2003. Vol. 94, № 4. P. 123–132.
3. Effects of prenatal stress on cellular and humoral immune responses in neonatal pigs / M. Tuchscherer [et al.] // Vet Immunol Immu-nopathol. 2002. Vol. 86, № 3. P. 195–203.
4. Bidarimath M., Tayade C. Pregnancy and spontaneous fetal loss: A pig perspective // Mol. Reprod. Dev. 2017. Vol. 84, № 9. P. 856–869.
5. Colostral antibody-mediated and cell-mediated immunity contributes to innate and antigen-specific immunity in piglets / M. Bandrick [et al.] // Dev. Comp. Immunol. 2014. Vol. 43, № 1. P. 114–120.
6. A novel real-time pcr assay for quantitative detection of campylobacter fetus based on ribosomal sequences / G. Iraola [et al.] // BMC Ve¬terinary Research. 2016. Vol. 12. P. 103–111.
7. Гистологическая техника / В.В. Семченко [и др.]. Омск: Омская областная типография, 2006. 290 с.
8. Burchard J., Randall G., Downey B. Production of prostaglandin by late-gestation porcine placental cells in vitro // J. Reprod. Fertil. 1992. Vol. 95, № 1. P. 167–173.
9. Maternal nutrition modulates fetal development by inducing placental efficiency changes in gilts / L. Che [et al.] // BMC Genomics. 2017. Vol. 18, № 1. P. 1–14.
10. Phagocytic activity in blood and proliferation of peripheral blood lymphocytes during the perinatal period in primiparous sows / B. Jakovac-Strajn [et al.] // J. Anim Physiol Anim Nutr. 2011. Vol. 95, № 3. P. 328–334.
