The purpose of research is to study the residual virulence, antigenic properties, duration of survival and contagiousness of the strain B. abortus 82-Tr. Determination of residual virulence was carried out on 45 guinea pigs divided into 9 groups of 5 animals each. Animals of the first group were immunized with a culture from the 82-Tr strain subcutaneously in the groin area in a volume of 1 ml with a content of 10 m.c.; the second – 50; the third – 100; the fourth – 500; fifth – 1000; sixth – 10 thousand; seventh – 100 thousand; eighth – 1 million; ninth – 9 billion m.c. To study the duration of survival of the B. abortus 82-Tr strain in the body of guinea pigs, its harmlessness and contagiousness, 21 animals were used, the first half of which were vaccinated with a culture of the 82-Tr strain at a dose of 1.5 billion m.c., and the second half (unvaccinated) were placed next to them. Within 4 months after the introduction of culture once a month, 3 guinea pigs from each group of animals were taken blood from the heart for serological studies, and then subjected to euthanasia, followed by bacteriological examination. It was found that the culture of the strain begins to take root at a concentration of 1000 m.k. With an increase in the concentration of the injected culture, there was a slight decrease in the infection index (II) to (42.0 ± 5.8) at 1 million m.c. and (40.0±15.3) at a dose of 1 billion m.c. Studies give reason to believe that the culture of strain 82-Tr has weak residual virulence.
brucellosis, infection, contagiousness, B. abortus, virulence, survival, tetracycline-resistant variant
Введение. Бруцеллез (Brucellosis) – зоонозная, преимущественно хроническая инфекционная болезнь различных видов домашних сельскохозяйственных, а также диких животных и человека, которая является одной из наиболее значимых и злободневных проблем ветеринарии и медицины [1]. Несмотря на улучшение эпизоотической ситуации по бруцеллезу животных в Российской Федерации, проблема оздоровления скота еще не решена [2]. Особенностью течения бруцеллезной инфекции является ее контагиозность. Болезнь особенно негативно проявляется у животных в молодом возрасте, вызывает гибель, слабое и позднее развитие, а, следовательно, недополучение продукции от них в зрелом возрасте [3, 4]. В системе противоэпизоотических мероприятий при бруцеллезе животных решающую роль всегда играла специфическая профилактика [5]. В связи с этим дальнейшее и детальное изучение инфекционного процесса бруцеллеза – главная задача ветеринарной и медицинской микробиологии.
Цель исследования – изучение остаточной вирулентности, антигенных свойств, длительности приживаемости и контагиозности штамма B.abortus 82-Tr (тетрациклинрезистентного варианта штамма B.abortus 82).
Материалы и методы. Определение остаточной вирулентности проводили на 45 морских свинках, разделенных на 9 групп. Животных первой группы иммунизировали вакциной из штамма 82-Tr подкожно в области паха в объеме 1 см3 с содержанием 10 м.к.; второй – 50; третьей – 100; четвертой – 500; пятой – 1 тыс.; шестой – 10 тыс.; седьмой – 100 тыс.; восьмой – 1 млн, девятой – 9 млрд м.к. Взвесь бруцелл разводили на фосфатно-забуферном растворе хлористого натрия (pH 8,0).
Бактериологический контроль вводимой дозы проводили путем высева взвеси бруцелл в объеме 0,1 мл на чашки Петри с триптозным агаром и последующим подсчетом выросших колоний. Через один месяц после иммунизации морских свинок подвергали эвтаназии с последующим проведением бактериологического и серологического исследований.
Для изучения длительности приживаемости культуры в организме морских свинок, ее безвредности и контагиозности использовали 21 животное, 10 из которых прививали культурой из штамма 82-Tr в дозе 1,5 млрд м.к., а 11 (непривитых) подсаживали к ним. В течение 4 месяцев после вакцинации раз в месяц у 3 морских свинок из каждой группы брали кровь из сердца для серологических исследований, а затем их подвергали эвтаназии с последующим бактериологическим исследованием.
Результаты и их обсуждение. При определении остаточной вирулентности и антигенных свойств штамма 82-Tr установили, что культура приживается в организме в дозе 10 м.к. От одной морской свинки выделили одну культуру бруцелл. Результаты исследований представлены в таблице 1. Серологические реакции этого животного были отрицательными, а также наблюдался самый низкий ИВС (индекс веса селезенки), равный (1,3±0,15). Результаты серологического и бактериологического исследований в группах животных, которым вводили 50, 100 и 500 м.к., были отрицательными. При бактериологическом исследовании установили, что начиная с концентрации 1 тыс. м.к. от одной морской свинки из этой группы были получены 2 культуры, от другой – 1, от третьей – посевы были стерильными.
Результаты исследования интактных морских свинок, подсаженных в клетку к вакцинированным животным, во все сроки были отрицательными.
Таблица 1
Остаточная вирулентность и антигенные свойства штамма B. abortus 82-Tr
|
Доза культуры, м.к. |
Кол-во животных |
РБП |
РА |
РСК |
Кол-во выделенных культур |
ИИ, % |
ИВС |
|
|
S-аг. |
R-аг. |
|||||||
|
10 |
5 |
Отриц. |
Отриц. |
Отриц. |
Отриц. |
1 |
2,0±2,0 |
1,33±0,15 |
|
50 |
5 |
Отриц. |
Отриц. |
Отриц. |
Отриц. |
0 |
0 |
1,72±0,20 |
|
100 |
5 |
Отриц. |
Отриц. |
Отриц. |
Отриц. |
0 |
0 |
1,86±0,13 |
|
500 |
5 |
Отриц. |
Отриц. |
Отриц. |
Отриц. |
0 |
0 |
1,73±0,05 |
|
1000 |
5 |
Отриц. |
Отриц. |
Отриц. |
1–1:10 4 – отриц. |
3 |
6,0±4,0 |
1,37±0,04 |
|
10 тыс. |
5 |
Отриц. |
Отриц. |
Отриц. |
10,0±0,0 |
18 |
36,0±2,5 |
1,74±0,23 |
|
100 тыс. |
5 |
Отриц. |
Отриц. |
Отриц. |
9,0±1,0 |
22 |
44,0±9,2 |
1,97±0,16 |
|
1 млн |
5 |
Отриц. |
Отриц. |
Отриц. |
16,0±2,5 |
21 |
42,0±5,8 |
2,07±0,10 |
|
1 млрд |
3 |
Отриц. |
Отриц. |
Отриц. |
40,0±20,0 |
12 |
40,0±20,0 |
2,73±0,87 |
Здесь и далее: отриц. – отрицательно.
Таблица 2
Длительность приживаемости и контагиозность штамма B.abortus 82-Tr на морских свинках
|
Срок исследования после вакцинации, мес. |
Группа животных |
Кол-во животных, голов |
РБП |
РА |
РСК |
Кол-во выделенных культур |
ИИ, % |
ИВС |
|
|
S-аг. |
R-аг. |
||||||||
|
1 |
Привитые |
3 |
Отриц. |
Отриц. |
Отриц. |
40,0±20,0 |
12 |
40,0±15,3 |
2,73±0,87 |
|
Подсаженные |
2 |
Отриц. |
Отриц. |
Отриц. |
Отриц. |
0 |
0 |
2,78±0,17 |
|
|
2 |
Привитые |
3 |
Отриц. |
Отриц. |
Отриц. |
46,7±17,7 |
5 |
16,7±3,3 |
1,40±0,10 |
|
Подсаженные |
2 |
Отриц. |
Отриц. |
Отриц. |
Отриц. |
0 |
0 |
1,775 |
|
|
3 |
Привитые |
3 |
Отриц. |
Отриц. |
Отриц. |
23,3±8,8 |
7 |
23,3± 8,8 |
1,90±0,10 |
|
Подсаженные |
2 |
Отриц. |
Отриц. |
Отриц. |
Отриц. |
0 |
0 |
0,09±0,14 |
|
|
4 |
Привитые |
3 |
Отриц. |
Отриц. |
Отриц. |
Отриц. |
1 |
3,3±3,3 |
1,99±0,21 |
|
|
Подсаженные |
2 |
Отриц. |
Отриц. |
Отриц. |
Отриц. |
0 |
0 |
1,85±0,15 |
Из таблицы 2 видно, что длительность приживаемости культуры штамма 82-Tr в организме животных составляет 4 месяца. Через один месяц ИИ составлял (40,0±5,3), через два месяца (46,7±17,7), через 3 месяца (23,3±8,8), а через 4 месяца был отрицательным. При этом от 3 морских свинок выделили всего одну культуру бруцелл.
Заключение. Таким образом, культура штамма 82-Tr обладает слабовыраженной остаточной вирулентностью, так как генерация вакцинного процесса наступает лишь от дозы 10 тыс. м.к. Приживаемость штамма составляет 4 месяца, контагиозностью не обладает. Культура штамма 82-Tr (тетрациклинрезистентный вариант штамма B. abortus 82) является слабовирулентным с минимальной инфицирующей дозой 1 тыс. м.к.
1. Brucellez sel'skohozyaystvennyh zhivotnyh na territorii Irkutskoy oblasti / A.M. Ablov [i dr.] // Vestnik APK Stavropol'ya. 2015. № 4 (20). S. 81–84.
2. Sistema kontrolya epizootologicheskogo processa brucelleza melkogo rogatogo skota / P.K. Arakelyan [i dr.] // Veterinariya. 2008. № 2. S. 20–22.
3. Garsiya Karril'o S. Brucellez zhivotnyh i cheloveka v Severnoy i Yuzhnoy Amerike. Parizh, 1990. S. 287.
4. Brucellez / P.N. Zhovanik [i dr.]. Kiev: Urozhay, 1975. S. 9.
5. Trilenko P.A. Brucellez sel'skohozyaystvennyh zhivotnyh. Leningrad: Kolos, 1976. S. 3–5.
6. Fomin A.M., Safina G.M., Sklyarov O.D. Etapy ozdorovleniya Samarskoy oblasti ot brucelleza krupnogo rogatogo skota // Mat-ly mezhunar. nauch. konf., posvyasch. 80-letiyu Samarskoy NIVS. Samara, 2009. S. 516–520.
7. Markernye lokusy genoma brucell dlya differencial'noy PCR indikacii patogennyh shtammov / N.I. Hammadov [i dr.] // Problemy osobo opasnyh infekciy. 2018. № 3. S. 88–93.
