Цель исследования – изучение взаимосвязи гормонального статуса маралов-рогачей и качества полученной спермопродукции в период гона. Задачи: определить уровень тестостерона и кортизола в крови маралов-рогачей в период гона и изучить взаимосвязь качества спермопродукции от уровня тестостерона. Исследования проводились в филиале ОС «Новоталицкое» ФГБНУ ФАНЦА (Алтайский край) в 2022 г. Объектом исследования являлись маралы-рогачи (n=10) в возрасте 6–9 лет с классами элита, первый и второй. Отбор биопродукции от маралов- рогачей проводили осенью в период гона, с использованием передвижного станка для фиксации марала при взятии спермы. Получение спермы осуществляли методом электроэякуляции по отработанным режимам, перед взятием проводили туалет препуция. Сперму собирали в стерильные спермоприемники, затем проводили ее качественную и количественную оценку. Одновременно проводили отбор крови на исследование уровня гормонов тестостерона и кортизола. Уровень тестостерона у маралов-рогачей колеблется в пределах 1,25–13,153 нмоль/л, кортизола – 35,00–260,00 нмоль/л. Наблюдается изменение уровня тестостерона в зависимости от классности животных. У маралов-рогачей классов элиты и первого с концентрацией гормона тестостерона выше 3,943 ± 2,20 нмоль/л во время гона наблюдается объем эякулята 3,5–7,0 мл, активность сперматозоидов до 9 баллов и концентрацией от 700 млн до 1,0 млрд/мл.
марал-рогач, спермопродукция, сыворотка крови, гормоны, тестостерон, гормональный статус
Введение. Отрасль пантового оленеводства направлена на получение основной продукции – пантов. Для рентабельности производства необходимо стремиться получать панты маралов 1-го сорта с максимальными показателями по массе и качеству консервирования. В маралохозяйствах России продолжают содержать маралов рогачей 2-го и 3-го классов с низкой пантовой продуктивностью. Искусственное осеменение маралов как один из методов проведения селекционно-племенной работы, направленной на повышение продуктивности животных, невозможно без создания банка качественной спермопродукции, пригодной для оплодотворения. В свою очередь, изучение взаимосвязи гормонального статуса маралов-рогачей с качеством получаемой спермопродукции и классностью самих животных по пантовой продуктивности позволит определить высококлассного донора для участия в искусственном осеменении. Изучением гормонов у пантовых оленей занимались отечественные и зарубежные исследователи: [1–6]. У перечисленных исследователей нет данных о взаимосвязи уровня тестостерона с качеством получаемой спермопродукции от маралов-рогачей во время гона.
Цель исследования – изучить гормональный статус маралов-рогачей и качество полученной спермопродукции в период гона.
Задачи: определить уровень тестостерона и кортизола в крови маралов-рогачей в период гона; изучить качество спермопродукции от уровня тестостерона.
Объекты и методы. Работа проведена в филиале «ОС Новоталицкое» ФГБНУ ФАНЦА (Алтайский край) в 2022 г.
Для отбора биопродукции от маралов-рогачей использовали передвижной станок для фиксации марала при взятии спермы. Маралам-рогачам перед взятием спермы вводили в/м Рометар в дозе, регламентированной производителем, затем через 15–20 мин производили фиксацию животных в станке (рис.).
Зафиксированный марал-рогач в станке перед взятием спермы
Перед взятием спермы осуществляли туалет препуция у маралов-рогачей с помощью приготовленного мыльного раствора с фурацилином, затем промывали дистиллированной автоклавированной водой и насухо протирали стерильной белой салфеткой. Получение спермы осуществляли электроэякулятором Волоскова, в прямую кишку маралу-рогачу вводили электрод, смоченный водой, на глубину 22–24 см, затем подавали ток 3–4 раза по 5 с с перерывом в 10 с, при этом напряжение составляло 6–8 В и сопротивление в цепи 1000 Ом. Стимуляцию эякуляции у маралов-рогачей проводили 2 раза с интервалом 7–10 мин между актами. Полученную сперму собирали в стерильные спермоприемники, затем проводили ее качественную и количественную оценку [7].
Для определения гормонального статуса маралов-рогачей в период гона и прослеживания взаимосвязи качества спермопродукции от уровня тестостерона отбирали 10 маралов-рогачей в период срезки пантов, определяли их классность по продуктивности. Осенью (октябрь) от данных маралов отбирали спермопродукцию, проводили ее оценку, параллельно брали кровь в вакуумные стерильные пробирки на исследование уровня гормона тестостерона и кортизола. После взятия пробирки размещали в термоящик на 4 часа для транспортировки и отстаивания сыворотки. Затем производили сливание сыворотки крови с помощью дозатора в пробирки эппендорфа по 300 мкл, наконечники дозатора меняли после каждого использования. Подписанные пробирки эппендорфа с сывороткой замораживали при температуре –20 °С. Исследования на гормоны проводили в ФГБНУ ФАНЦА (отделе ВНИИПО) на анализаторе иммуноферментных реакций MR-96A с применением наборов реагентов для иммуноферментного определения гормонов фирмы «ХЕМА» и «вектор БЭСТ».
Полученные данные подвергались стандартной статистической обработке [8] с помощью программы MS Excel.
Результаты и их обсуждение. Для отработки усовершенствованного метода фиксации маралов-рогачей при отборе спермопродукции использовали запатентованный передвижной станок для фиксации марала при взятии спермы.
В результате проведенных экспериментов по отбору биоматериала от маралов-рогачей применяли препарат Рометар, что позволило отобрать жизнеспособную сперму с минимальным травматизмом для животного. Время подготовки для отбора биопродукции и фиксации маралов-рогачей в положении лежа на боку с применением препарата Рометар составило 30 мин, из них 20 мин – время начала действия препарата, 10 мин – время фиксации. Фиксация в подвешенном состоянии маралов-рогачей составляла 15–20 мин.
При взятии спермы от маралов-рогачей производили отбор крови для исследования на уровень гормонов тестостерона и кортизола. Результаты исследований представлены в таблице 1.
Таблица 1
Уровень тестостерона и кортизола в крови маралов-рогачей
в период гона при взятии спермы
|
Группа рогачей, дата отбора |
Возраст, лет |
Класс по продуктивности |
Тестостерон, нмоль/л |
Кортизол, нмоль/л |
|
n = 6 05.10.2022 |
6–9 |
1 |
3,9 (1,3–13,2) |
106,5 (35,0–260,0) |
|
n = 2 05.10.2022 |
6–7 |
Элита |
4,7 (4,5; 4,9) |
168,0 (157,0; 179,0) |
|
n = 2 05.10.2022 |
8 |
2 |
1,7 (1,2; 2,2) |
136,0 (130,0; 142,0) |
Уровень тестостерона у маралов-рогачей колеблется в пределах 1,3–13,2 нмоль/л, кортизола – 35,00–260,00 нмоль/л. У испытуемых животных с классностью элита и первым классом по продуктивности уровень тестостерона выше, чем у рогачей второго класса, на 2,2–3,0 нмоль/л. Невысокие значения кортизола в момент отбора спермы у маралов-рогачей объясняются проведением премедикации Рометаром.
Результаты исследований взаимосвязи качества спермопродукции от уровня тестостерона представлены в таблице 2.
Таблица 2
Качественные показатели спермы маралов-рогачей
в зависимости от уровня тестостерона во время гона
|
Группа рогачей, дата отбора |
Возраст, лет |
Класс по родуктивности |
Тестостерон, нмоль/л |
Качественная оценка нативной спермы |
|||
|
Объем, мл |
Цвет |
Активность, балл |
Концентрация, млн/мл |
||||
|
n = 6 05.10.2022 |
6–9 |
1 |
3,9 (1,3– 13,2) |
4,0 (2,0–6,0) |
Белый 50 % Желтый 50 % |
2,0 (0,0–5,0) |
683,3 (500,0–900,0) |
|
n = 2 05.10.2022 |
6–7 |
Элита |
4,7 (4,5; 4,9) |
6,8 (6,5; 7,0) |
Белый |
8,5 (8,0; 9,0) |
950,0 (900,0; 1000,0) |
|
n = 2 05.10.2022 |
8 |
2 |
1,7 (1,2; 2,2) |
3,8 (3,5;4,0) |
Желтый |
1,0 (0,0; 2,0) |
550,0 (500,0; 600,0) |
Отмечается низкая активность сперматозоидов или ее отсутствие в образцах спермы желтого цвета. У трех маралов-рогачей первого класса и всех испытуемых животных второго класса присутствовало желтое окрашивание. Окрашивание в желтый цвет эякулята обусловлено примесью бульбоуретральных желез, представляющей собой тягучую жидкость, выделяемую в мочеиспускательный канал при проведении электроэякуляции. При этом объем эякулятов составляет 4,0–6,0 мл и концентрация сперматозоидов 600–900 млн/мл. У маралов-рогачей классов элиты и первого с концентрацией гормона тестостерона выше 3,9±2,20 нмоль/л во время гона наблюдается объем эякулята 3,5–7,0 мл, активность сперматозоидов до 9 баллов и концентрацией от 700 млн до 1,0 млрд/мл. Исключением является один образец, в эякуляте которого наблюдалась железистая жидкость желтого цвета, пагубно воздействующая на жизнеспособность спермиев.
Заключение
- Уровень тестостерона и кортизола в период гона у маралов-рогачей разных классов продуктивности варьировал в пределах 1,2–13,2 и 35,0–260,0 нмоль/л соответственно.
- Качество полученной нативной спермы выше у маралов-рогачей первого класса и элиты в сравнении со вторым классом, так, концентрация сперматозоидов выше на 133,3–400,0 млн/мл, активность – 1,0–7,5 баллов, объем эякулята – 0,2–3,0 мл соответственно.
1. Никитин С.А. Гормональный статус и морфобиохимические показатели крови маралов в зависимости от возраста и пантовой продуктивности: автореф. дис. … канд. с.-х. наук. Новосибирск, 2005. 23 с.
2. Луницын В.Г., Кротова М.Г. Гормональный статус маралов-рогачей алтае-саянской породы // Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук. 2012. № 5. С. 72–74.
3. The Antler Cycle and Fecak Testosterone of Male Sambar Deer Rusa unicolor at the Horton Plains National Park in Sri Lanka / D.S. Weerasekera [et al.] // BioMed Research International. 2020. 7 p.
4. Seasonal variations in serum concentrations of testosterone, testicular volume and neck circumference of fallow deer (Dama dama) kept ex situ in a tropical region / C.S. Pizzutto [et al.] // Zoo Biology. 2019, vol. 38, № 4, P. 355–359,.
5. Development of in-house RIA kit for progesterone in cow's skim milk / A. Benabdelaziz [et al.] // Journal of Immunoassay and Immunochemistry. 2020. Vol. 41, № 2, P. 195–207.
6. Jose Luis Ros-Santaella, Eliana Pintus, Jose Julian Garde. Intramale variation in sperm size: functional significance in a polygynous mammal. 2015.
7. Боранбаев А.В. Оптимальный режим работы электроэякулятора Волоскова при взятии нативной спермы от маралов-рогачей // Актуальные проблемы сельского хозяйства горных территорий: мат-лы VII Междунар. науч.-практ. конф. Горно-Алтайск: БИЦ ГАГУ, 2019. С. 136–139.
8. Биометрия в животноводстве: учеб. пособие / Н.И. Коростелева [и др.]. Барнаул: Изд-во АГАУ, 2009. 210 с.
