Свиноводство по-прежнему несет значительные экономические потери за счет инфицирования животных микоплазмами. Патогенное влияние этих бактерий на организм свиней особенно ярко проявляется у молодняка. Цель исследований – изучение характера воздействия микоплазменной инфекции на иммунный статус поросят. Для оценки эпизоотологического состояния комплекса по микоплазмозу были проведены выборочные исследования крови всех технологических групп свиней с помощью реакции РНГА и выведения процента зараженности. Заболеваемость определяли по числу выявленных животных с клиническими признаками болезни среди инфицированных, а летальность – по количеству погибших особей из числа заболевших микоплазмозом. Белковые фракции крови определяли у поросят на биохимическом анализаторе ERBA-XL100. Определение Т-лимфоцитов делали методом спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана (Е-РОК). Определение В-клеток проводили в реакции комплиментарного розеткообразования (ЕАС-РОК). Установлено, что зараженность микоплазмозом свиней в различных группах на комплексе колебалась в пределах 24,2–65,7 %, при этом наибольший процент заболеваемости (26,8 %) и летальности (18,6 %) особей наблюдался среди поросят на доращивании. Негативное влияние микоплазменной инфекции на иммунный статус молодняка свиней проявлялось фактором снижения общего белка (на 13,5 %) и гамма-глобулиновой фракции (на 17,8 %) в сыворотке крови больных поросят по сравнению со здоровыми. Воздействие патогенных микоплазм на клеточное звено иммуннокомпетентной системы организма больных поросят проявлялось снижением у них T-лимфоцитов на 11 %, а B-лимфоцитов на 21,4 % по сравнению со здоровыми животными.
молодняк свиней, микоплазмоз, белковые фракции сыворотки крови, Т- и В-лифоцитарная система крови, супрессия иммунитета
Введение. Свиноводство нашей страны по-прежнему несет значительные экономические потери за счет бактериальных инфекций. Возникновение таких патологий связано с нарушением гомеостаза в организме свиней, которое происходит за счет дисбаланса современной промышленной технологии разведения этих животных, и генетическим уровнем их продуктивности. Чаще всего нарушение физиологического состояния свиней наиболее ярко проявляется в периоды доращивания и откорма поросят, когда появляются нарушения в кормлении и содержании молодняка и возникает снижение защитных сил их организма за счет ослабления иммунитета. Именно в этот период в свиноводческих хозяйствах наблюдаются вспышки пневмонии, вызванные микоплазмами. По данным исследований, проведенных в 25 свиноводческих предприятиях европейской части России, патогенные микоплазмы вида Micoplasma hyopneumoniae были выявлены у животных в 23 хозяйствах, что составило 92 %. Причем бактерии обнаруживались в организме всех половозрастных групп свиней, но наибольший процент заражения (21,7–33,3 %) наблюдался у поросят 2–3-месячного возраста, а смертность среди них составляла 55,8 %. Микоплазменная инфекция также широко распространена и в свиноводческих хозяйствах Урала и Сибири. Так, в хозяйствах Омской и Тюменской областей зараженность микоплазмозом поросят колебалась в пределах 65–80 %, а заболевание встречалось как в виде моноинфекции, так и в ассоциативной форме [1–5].
Патогенное влияние этих бактерий на организм свиней особенно ярко проявляется у молодняка. Микоплазмы, как внутриклеточные паразиты, вызывают поражение эпителиальных клеток легочной системы животных, что делает их слабо доступными для антител и комплемента. В процессе метаболизма эти бактерии выделяют гемолизин и термостабильный эндотоксин. Заболевание, вызванное микоплазмами, проявляется острой очаговой или разлитой бронхопневмонией, но может принимать затяжное течение и сопровождается осложнениями (эндокардит, нефрит, эмфизема легких). Инфекция часто носит ассоциативный характер, к микоплазмам в организме свиней присоединяются другие патогенные бактерии и вирусы, что усиливает тяжесть респираторного заболевания и иммуносупрессивное действие. В этой связи существенную роль в борьбе с бактериями играет напряженность иммунитета животных, тесно связанная с наличием в крови иммунных лимфоцитов. Защитная реакция организма осуществляется взаимодействием клеточного и гуморального звена иммунитета. Клеточное звено представляется функционированием Т-лимфоцитов, а гуморальное звено – В-лимфоцитов и образованием антител. Особенностью этих клеток является способность к распространению по всему организму и постоянное нахождение в кровотоке [2, 6–8].
Сообщений по вопросу супрессивного воздействия микоплазм на клеточный иммунитет свиней в литературе очень мало. Имеются некоторые сведения по влиянию микоплазменной инфекции на иммунный статус взрослых животных, которые связаны с серологической диагностикой и лечением таких заболеваний. Еще больше опубликовано данных по динамике постнатального развития клеточного и гуморального звеньев иммунокомпетентной системы у телят и изменению иммунологического статуса этих животных при массовых инфекционных болезнях. Также известны работы авторов по исследованию активности Т- и В-лимфоцитов при паразитарных болезнях скота. Поэтому изучение механизма изменения иммунологических реакций в организме молодняка свиней при микоплазменной инфекции представляет особый интерес, так как позволяет глубже изучить этот процесс и использовать его для коррекции иммунитета при респираторных заболеваниях [1, 9–13].
Для диагностики микоплазмоза применяют бактериологический и серологический методы. Выделение микоплазм проводится в острый период болезни путем высева мокроты из слизистой оболочки носоглотки животных (прижизненная диагностика) на кровяной агар. От павших свиней для исследований берут фрагменты пораженных верхушечных или сердечных долей легких. В лаборатории, после обработки патологического материала, тканевую взвесь высевают на обычные бактериологические среды. Идентификацию выросших культур осуществляют изучением культуральных свойств, ферментативной и гемолитической активности бактерий, микроскопией. Серологические методы исследований включают использование РСК, РНГА, ИФА(ELISA), ПЦР. Разработан метод экспресс-диагностики, проводимой с помощью специфических меченых флюоресцирующих антисывороток (РНИФ) [1, 2, 4, 14].
Цель исследований – изучение характера воздействия микоплазменной инфекции на иммунный статус молодняка свиней.
Задачи: выяснение эпизоотической ситуации на свиноводческом комплексе по микоплазмозу и определение степени воздействия возбудителей болезни на состав белковых фракций сыворотки крови, а также на реактивность иммунных лимфоцитов.
Объекты и методы. Научно-исследовательская работа проводилась в условиях ООО «Комплекс» Исетского района, а также на базе лаборатории гематологии ИБиВМ ФГБОУ ВО ГАУ Северного Зауралья и серологического отдела ГАУ ТО «Тюменская областная ветеринарная лаборатория».
Для оценки эпизоотологического состояния комплекса по микоплазмозу были проведены выборочные исследования крови всех технологических групп свиней с помощью реакции РНГА и выведения процента зараженности. Заболеваемость определяли по числу выявленных животных с клиническими признаками болезни среди инфицированных, а летальность – по количеству погибших особей из числа заболевших микоплазмозом.
Опыты по определению напряженности иммунитета проводились на поросятах 3-месячного возраста помесной породы (крупная белая – дюрок). Для этого было сформировано две группы особей: больные и здоровые (по 5 голов в каждой). Животные для исследований были подобраны по принципу аналогов и находились в одинаковых условиях содержания и кормления. Кровь для исследований брали из поверхностной яремной вены больных и здоровых поросят с помощью вакуумных пробирок.
Белковые фракции сыворотки крови определяли на биохимическом анализаторе ERBA-XL100. Определение Т-лимфоцитов делали методом спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана (Е-РОК). Определение В-клеток проводили в реакции комплементарного розеткообразования в системе (ЕАС-РОК). В камере Горяева под фазоконтрастным микроскопом подсчитывали по 100 лимфоцитов в каждой пробе и определяли процентное содержание розеткообразующих клеток, связанных с тремя эритроцитами и более.
Полученные результаты подвергали статистической обработке с определением средних значений процента клеток розеткообразования, стандартных отклонений и ошибок репрезентативности этих значений (X ± Sx), коэффициентов вариации (Cv), при Р = 0,95 в программе MS Excel.
Результаты и их обсуждение. В диаграмме показана структура зараженности патогенными микоплазмами свиней в различных группах на комплексе, а также параметры заболеваемости и летальности животных. Она свидетельствует о широком распространении инфекции среди свинопоголовья, а главным ее источником, по-видимому, являются свиноматки. В хозяйстве наблюдается вертикальный и горизонтальный путь передачи инфекции. Циркуляция бактерий начинается с инфицирования поросят внутриутробно и далее в подсосный период. У хряков, свиноматок и подсосных поросят заболевание носит скрытый характер, что обусловлено повышенным иммунологическим потенциалом их организма. Клиническое проявление микоплазмоза начинается у отъемных поросят и резко возрастает после их перевода на доращивание в результате угасания колострального иммунитета. Тогда же выявляется наибольший процент заболеваемости особей (26,8 %) среди зараженных поросят (65,7 %) и летальности (18,6 %) среди заболевших животных. В данном случае можно говорить о длительно развивающейся инфекции, когда заражение поросят происходит часто в пре- и постнатальный период, а прорыв иммунитета и клинические признаки появляются уже после отъема. Такая закономерность в развитии заразных заболеваний молодняка отмечена и другими авторами [2–4, 13].
Результаты наших опытов по изучению воздействия микоплазменной инфекции на иммунный статус поросят показали ее негативное влияние.
Проявление микоплазменной инфекции
в различных технологических группах свиней в ООО «Комплекс»
В таблице 1 отражены количественные параметры общего белка и его фракций в сыворотке крови у больных и клинически здоровых поросят. Из нее видно, что средние значения общего белка в двух группах животных не соответствовали норме, вероятно, из-за недостатка протеинов в кормах. У больных поросят этот показатель был ниже, чем у здоровых, на 13,5 %, при этом альбуминовая и α-глобулиновая фракции мало отличались друг от друга в этих группах свиней. Значительно различались показатели бета- и гамма-глобулинов у больных и здоровых подсвинков. Содержание первой фракции в сыворотке крови больных поросят было выше на 12,0 %, а второй – ниже на 17,8 % по сравнению с клинически здоровыми животными. Редукция γ-глобулиновой фракции в сыворотке крови больных поросят свидетельствует о супрессивном действии микоплазм на иммунные лимфоциты, продуценты антител, которые составляют эти белки. Альбумин-глобулиновое соотношение в той и другой группе молодняка свиней находилось в пределах нормы. Наши опытные данные в некоторой степени согласуются с другими исследователями иммунного статуса животных, которые наблюдали угнетение антителогенеза и снижение гамма-глобулиновой фракции белков у больных особей [2, 7, 11].
Таблица 1
Содержание общего белка и белковых фракций
в сыворотке крови больных микоплазмозом и здоровых поросят
|
Показатель |
Норма |
Группа животных (n = 5) |
|
|
Больные |
Здоровые |
||
|
Общий белок, г/л |
75,0 – 85,0 |
62,9±2,72 |
71,4±3,87 |
|
Альбумины, % |
42,0 – 55,0 |
47,5±2,23 |
49,2±2,76 |
|
Альфа-глобулины,% |
14,0 – 20,0 |
21,6±1,93 |
18,9± 1,57 |
|
Бета-глобулины,% |
16,5 – 21, 0 |
14,2±1,49 |
12,5±1,36 |
|
Гамма-глобулины,% |
17,0 – 25,0 |
16,3±1,31 |
19,2±0,91 |
|
Альбумин-глобулиновое соотношение |
0,85 – 1,0 |
0,91±0,06 |
0,97±0,04 |
Лабораторными исследованиями установлено, что у больных поросят по сравнению со здоровыми было меньше T-лимфоцитов на 11 %, а B-лимфоцитов на 21,4 % (табл. 2). Полученные данные свидетельствуют о супрессии клеточного иммунитета в организме заболевших микоплазмозом животных, при этом гуморальный иммунитет, связанный с количеством B-лимфоцитов, был угнетен более сильно. Обращают на себя внимание высокие коэффициенты вариации полученных средних значений генераций иммунных лимфоцитов. Такая вариабельность говорит о различиях в напряженности иммунитета поросят даже в одной технологической группе либо о разных сроках инфицирования и развития заболевания у животных. О свойстве T- и B-клеток, а именно о поддержании иммунологического гомеостаза и обеспечении защитных сил организма животных, писали многие авторы. Большинство из них склонялись к тому, что при острых инфекциях происходит активация иммунокомпетентных клеток крови, а при переходе в хроническую форму – угнетение [6, 9, 10, 13]. Между тем информация об иммунологических реакциях, происходящих в организме свиней при микоплазмозе, весьма актуальна, особенно при длительно развивающейся инфекции [7, 8, 12].
Таблица 2
Содержание Т- и В-лимфоцитов в крови здоровых и клинически
больных микоплазмозом поросят (n = 5)
|
Группа животных |
Стат. показатель |
Количество клеток, % |
|
|
Т-лимфоциты |
В-лимфоциты |
||
|
Больные |
X±Sx |
42,20±3,61 |
14,63±2,36 |
|
Cv |
8,6 |
9,3 |
|
|
Здоровые |
X±Sx |
47,40±3,12 |
18,16±1,62 |
|
Cv |
6,5 |
8,9 |
|
Таким образом, проведенные исследования выявили негативное воздействие на резистентность поросят микоплазменной инфекции, которое выражалось в редукции общего белка и глобулинов, а также супрессии иммунных лимфоцитов в организме больных животных.
Заключение
1. Зараженность микоплазмозом свиней в различных группах на ООО «Комплекс» колебалась в пределах 24,2–65,7 %, при этом наибольший процент заболеваемости (26,8 %) и летальности (18,6 %) особей наблюдался среди поросят на доращивании.
2. Негативное влияние микоплазменной инфекции на резистентность молодняка свиней проявлялось фактором снижения общего белка (на 13,5 %) и гамма-глобулиновой фракции (на 17,8 %) в сыворотке крови больных поросят по сравнению со здоровыми.
3. Воздействие патогенных микоплазм на клеточное звено иммуннокомпетентной системы организма больных поросят проявлялось снижением у них T-лимфоцитов на 11 %, а B-лимфоцитов на 21,4 % по сравнению со здоровыми животными.
1. Бычкова А.А., Строгонова И.Я. Диагностика микоплазменных, вирусных и хламидиозных инфекций свиней методом ПЦР в хозяйствах Средней Сибири. // Вестник КрасГАУ. 2015. № 1. С. 166–169.
2. Жонголович А.Е., Березкина Г.В. Микоплазмоз свиней // Проблемы ветеринарной и зоотехнической наук и пути их решения: сб. науч. тр. ИВМ ОмГАУ. Омск, 2008. С. 74–79.
3. Красиков А.П., Колычев Н.М., Земляницына-Бессонова И.Ю. Применение бетулина в экспериментальных условиях при микоплазмозе, микоплазмоз-ассоциированной инфекции, цирковирозе и роже свиней // Вестник Омского ГАУ. 2016. № 2 (22). С. 158–163.
4. Микоплазменная инфекция у свиней / Л.И. Ефанова [и др.] // Достижения науки и техники АПК. 2012. № 1. С. 35–36.
5. Fano E., Pijoan C., Dee S. Effect of Micoplasma hyopneumoniae colonization at weaning on disease severity in growring pigs // Canadian Journal of Veterinary Research. 2007. Vol. 71. P. 195–200.
6. Пацула Ю.И., Мироненко В.А., Кондауров Б.Н. Т- и В-системы иммунитета у телят при некоторых инфекциях // Ветеринария. 1983. № 10. С. 34–35.
7. Карпуть И.М., Бабина М.П., Бабина Т.В. Клинико-морфологическое проявление иммунных дефицитов и их профилактика у молодняка // Актуальные проблемы ветеринарной патологии и морфологии животных: мат-лы междунар. науч.-практ. конф. Воронеж, 2006. С. 46–51.
8. B-lymphocyte lineage cells and the respiratory system / A. Kato [et al.] // J. Allergy Clin Immunol. 2013. Vol. 131. P. 933–957.
9. Мальцева Т.В. Динамика постнатального развития клеточного и гуморального звеньев иммунокомпетентной системы телят // Актуальные вопросы ветеринарной медицины: мат-лы VIII Сиб. ветеринар. конф. Новосибирск, 2008. С. 232–234.
10. Буканов А.М., Маннапова Р.Т. Клеточное звено иммунитета при сальманеллезно-криптоспоридиозном заболевании телят // Современные проблемы иммуногенеза, теории и практики борьбы с паразитарными и инфекционными болезнями сельскохозяйственных животных: мат-лы междунар. науч.-практ. конф. М.; Уфа, 2004. С. 67–68.
11. Григолия С.Б. Иммунологический статус телят при массовых инфекционных болезнях // Российский иммунологический журнал. 2013. Т. 7, № 2 (3). С. 184.
12. Еремина И.Ю., Макарская Г.В. Анализ влияния эндогенных и экзогенных факторов на функциональную активность клеток крови у быков // Вестник КрасГАУ. 2021. № 8. С. 131–39.
13. Окунев А.М. Иммунореактивные изменения в организме откормочных бычков при спонтанном гиподерматозе // Вестник Мичуринского государственного аграрного университета. 2020. № 2 (61). С. 136–140.
14. Meens J., Selke M., Gerlach G.F. Identification and immunological characterization of conserved Mycoplasma hyopneumoniae lipoproteins Mhp378 and Mhp651 // Vet. Microbiol. 2006. № 116. P. 85–95.
