Россия
Россия
Цель исследования – установить степень соответствия показателей N-тестера SPAD502 истинному содержанию хлорофилла и азота в растениях сельскохозяйственных культур. Исследование проводилось в 2020–2021 гг. на территории землепользования ОАО птицефабрики «Заря», относящейся к агроэкологической зоне Красноярской лесостепи. Мониторинг растений на содержание хлорофилла осуществлялся в производственных посевах яровой пшеницы Новосибирская 29 и Новосибирская 31, а также в посевах различных сортов рапса, сои, льна масличного и пшеницы на участке ГСУ, расположенных на черноземе выщелоченном с содержанием гумуса 6,8–7,3 %; рНсол. – 6,9; Р2О5 – 175 мг/кг; К2О – 210 мг/кг (по Чирикову). Полевое определение концентрации хлорофилла проводили с помощью портативного прибора N-тестер SPAD-502. Исследовался флаговый лист растений. Все работы проводились в солнечную безветренную погоду при температуре 21–23 °С. Листья, прошедшие тестирование портативным прибором, в дальнейшем анализировались в лаборатории на содержание хлорофилла и валового азота. Содержание хлорофилла определяли спектрофотометрически с помощью прибора Cary 60 UV-Vis Agilent Technologies при длинах волн 470, 649, 665 и 720 нм. Пигменты извлекались из растительной ткани растворителем (96 % этанол). Определение общего азота проводили колориметрически с использованием метода мокрого озоления и реакции образования индофенольной зелени. Установлено, что содержание хлорофилла a варьировало в диапазоне 1,22–8,26 мг на 1 г сухой биомассы растения, содержание хлорофилла b – в диапазоне 1,19–9,16, содержание общего хлорофилла – в диапазоне 2,68–17,42, содержание валового азота – 0,28–0,31 %. Величина SPAD изменялась в пределах 2,9–44,7 единиц. Выявлена тесная корреляционная связь (r = 0,703–0,868) между показаниями прибора и содержанием хлорофилла и азота в растениях. Результаты исследований показывают возможность применения фотометрического метода как инструмента оперативной диагностики азотного питания растений. Использование данного прибора может заменить более трудоемкие и дорогостоящие методы химической диагностики.
питание растений, сельскохозяйственные культуры, фотометрическая диагностика, N-тестер SPAD-502, хлорофилл, азот, корреляция
Введение. Азот является одним из важнейших питательных элементов для растений. Эффективное регулирование азотного питания может оптимизировать урожайность сельскохозяйственных культур, повысить рентабельность и минимизировать потери азота. Однако управление азотом является довольно сложным процессом, что обусловлено, в первую очередь, его высокой вариабельностью и динамичностью в агроценозах [1, 2].
На почвах земледельческой территории Сибири азот находится в первом минимуме, что предопределяет высокую и устойчивую эффективность азотных удобрений под все сельскохозяйственные культуры [3, 4]. Производственная отдача от применения азотных удобрений в виде получения дополнительной продукции во многом зависит от точности и оперативности диагностики азотного питания растений. Вопросы диагностики минерального питания в агрофитоценоценозах сельскохозяйственных культур были всегда актуальными, поскольку имели не только производственное и агроэкологическое, но и экономическое значение.
В настоящее время наряду с традиционными лабораторными методами диагностики находит применение фотометрический метод экспресс-диагностики азотного питания, в основе которого лежит определение интенсивности флуоресценции хлорофилла в листьях при регистрации и анализе оптических реакций (сигналов-откликов) растений в двух спектральных каналах при облучении их инфракрасными лучами. Основой метода является выявленная зависимость обеспеченности растений азотом от содержания хлорофилла в листьях, его фотоактивности (флуоресценции). Поэтому исходным принципом диагностической фотометрии служит определение в листьях концентрации хлорофилла или интенсивности флуоресценции [5].
Традиционные методы измерения содержания хлорофилла и валового азота, предусматривающие экстракции различными растворителями, являются достаточно точными, однако требуют много времени и затрат. Вместе с тем значительные потери пигментов могут происходить во время экстракции и разбавления, что приводит к высокой вариабельности результатов [6].
Современные методы экспресс-диагностики азотного питания предусматривают применение портативных приборов, показания которых косвенно отражают обеспеченность растений азотом. Работа N-тестера основана на измерении содержания хлорофилла в листе (в инфракрасном диапазоне), что сопряжено с уровнем азотного питания культуры. Для практического применения показателей N-тестера необходимы знания о корреляции между показателями прибора, с одной стороны, содержанием хлорофилла и азота – с другой, определенными стандартными лабораторными методами [7]. Это обстоятельство определяет актуальность проведенной работы. Методы диагностики состояния растений без разрушения их тканей используются в сельском хозяйстве более трех десятилетий. Эти методы, основанные на поглощении или отражении определенных длин волн света неповрежденными листьями, в последнее время заменили традиционные методы мокрой химической экстракции. Тем не менее, методы экстракции все еще необходимы для получения эталонных значений для оценки эффективности оптических методов.
Исследования, в которых проводились калибровки N-тестера SPAD-502, обычно описываются линейной зависимостью [8, 9], что соответствует пропорциональной зависимости между концентрацией пигмента и поглощением. Однако в ряде других исследований сообщается о криволинейной зависимости между хлорофиллом и значениями SPAD [10, 11]. Некоторые исследования показывают, что математические зависимости между показаниями SPAD-502 и хлорофиллом листьев могут меняться в зависимости от стадии роста растений и условий выращивания [12]. Предлагалось несколько объяснений этой нелинейности, таких как неравномерное распределение хлорофилла и излучения по поверхности листа и дифференциальное рассеяние, отражение фотонов при 650 и 940 нм [11, 13]. Поэтому математический расчет корреляции между значением SPAD и содержанием хлорофилла и азота может быть важным для оптимизации расширенной интерпретации данных, полученных с помощью хлорофиллометра. В целом методология интерпретации данных, получаемых помощью N-тестера SPAD-502, имеет некоторые неопределенности и требует дополнительных исследований.
Цель исследования – установить степень соответствия показателей N-тестера SPAD-502 истинному содержанию хлорофилла и азота в растениях сельскохозяйственных культур.
Объекты и методы. Исследование проводилось в 2020–2021 гг. на территории землепользования ОАО птицефабрики «Заря», относящейся к агроэкологической зоне Красноярской лесостепи. Мониторинг растений на содержание хлорофилла осуществлялся в посевах яровой пшеницы Новосибирская 29 и Новосибирская 31, расположенных на равнинной, открытой территории. Почва – чернозем выщелоченный с содержанием гумуса 6,8–7,3 %; рНсол. – 6,9; Р2О5 – 175 мг/кг; К2О – 210 мг/кг (по Чирикову).
Полевое определение концентрации хлорофилла проводили с помощью портативного прибора N-тестер SPAD-502. Исследовался флаговый лист пшеницы, который отбирался для дальнейшего лабораторного анализа. Полевое определение концентрации хлорофилла с помощью N-тестер SPAD-502 проводили также на территории ГСУ, расположенном на сопредельных полях. Исследованиям подвергались растения рапса, сои, льна масличного, пшеницы. Кроме того, измерения осуществлялись в образцах растений ячменя и овса, отобранные на опытном поле ОПХ «Минино». Все работы проводились в солнечную безветренную погоду при температуре 21–23 °C.
Листья, прошедшие тестирование портативным прибором, в дальнейшем анализировались в лаборатории на содержание хлорофилла и валового азота. Содержания хлорофилла определяли спектрофотометрически с помощью прибора Cary 60 UV-Vis Agilent Technologies при длинах волн 470, 649, 665 и 720 нм. Пигменты извлекались из растительной ткани растворителем (96 % этанол) по общепринятой методике [14]. Аликвота этого экстракта использовалась для определения содержания хлорофиллов a и b, а результаты выражались в мг хлорофилла/г высушенной ткани. Определение общего количества азота производили колориметрически с использованием метода мокрого озоления и реакции образования индофенольной зелени [15]. Озоление растительного материала проводили смесью концентрированной серной кислоты, содержащей селен, и 30 % раствора перекиси водорода. Повторность эксперимента – трехкратная. Результаты исследования обрабатывали методом корреляционно анализа в программе MS Excel с помощью пакета анализа.
Результаты и их обсуждение. Известно, что зеленые листья представляют собой интегральные органы информации о минеральном питании растений, в т. ч. и об азотном [16]. Концентрация хлорофилла напрямую зависит от обеспеченности растений азотным питанием. Характерной особенностью химического состава хлорофиллов а и b служит наличие в их молекулах (C5 5H7 2O5N4Mg и С5 5Н7 0О6N4Mg соответственно) четырех атомов азота, что и предопределяет зависимость концентрации хлорофилла в листьях (основных фотосинтезирующих органах) от обеспеченности растений азотным питанием [17].
На рисунке 1 представлена зависимость содержания общего хлорофилла от показателей содержания валового азота в растениях пшеницы мягкой яровой. Данная зависимость имела линейный характер с коэффициентом детерминации R2 = 0,4321.
На рисунке 2 представлены графические данные зависимости показателей N-тестера от показателей содержания валового азота, полученного лабораторным методом в листьях пшеницы.
Рис. 1. Сопряженная зависимость содержания хлорофилла a+b
с содержанием валового азота в листьях пшеницы
Рис. 2. Корреляционная зависимость показателей N-тестера
от содержания азота в листьях пшеницы
Графическое отображение указывает, что связь показаний N-тестера и валового содержания азота имела линейный характер с высоким коэффициентом детерминации (R2 = 0,6164). Функциональная зависимость данных двух показателей имела вид y = 0,0009x + 0,279.
Наши исследования были посвящены поиску связи показателей N-тестера с показателями концентрации хлорофилла, установленными стандартными лабораторными методами. Результаты сравнительного анализа полученных данных показывают, что коэффициенты корреляции между значением N-тестера и тремя параметрами хлорофилла были существенными (рис. 3). Значение парной корреляции между содержанием общего хлорофилла и показателями N-тестера SPAD-502 для всех исследуемых растений r = 0,703 с зависимостью вида y = 5,1554e0,0245x. Для хлорофилла a уравнение имело вид y = 0,1218x + 1,8285 с коэффициентом корреляции r = 0,616. Для хлорофилла b y = 0,1088x + 2,3405 c корреляцией r = 0,675. На графике видно, что коэффициент корреляции между значением N-тестера и тремя параметрами хлорофилла были значительными. С увеличением значения N-тестера содержание хлорофилла имело тенденцию к синхронному увеличению. Можно наблюдать, что тангенс угла наклона линии регрессии между общим содержанием хлорофилла и значением SPAD составляет 5,15, что свидетельствует о высокой скорости изменения данных вдоль линии регрессии и значительной их связанности.
Рис. 3. Зависимость показателей N-тестера SPAD502
и содержания хлорофилла во всех исследуемых образцах
Рис. 4. Зависимость показателей содержания хлорофилла a + b,
валового азота и показателей N-тестера в образцах пшеницы
Практическое значение показателей N-тестера заключается в их использовании в технологиях внекорневой подкормки растений в течение вегетационного периода. На рисунке 4 представлены графические данные зависимости показателей N-тестера от содержания хлорофилла и валового азота, полученным лабораторным методом в листьях пшеницы. Установлено, что эта связь в обоих случаях положительна и линейна. Коэффициенты корреляции между значением N-тестера и тремя параметрами хлорофилла, а также валового азота были существенны (табл.).
Зависимость показателей N-тестера SPAD502
от содержания хлорофилла и азота в листьях пшеницы
|
Форма хлорофилла, валовый азот |
Коэффициент корреляции и коэффициент детерминации |
Уравнение регрессии |
|
Хл a+b |
R2 = 0,755 r = 0,868 |
y = 0,3307x + 1,7105 |
|
Хл a |
R2 = 0,719 r = 0,848 |
y = 0,171x + 0,7114 |
|
Хл b |
R2 = 0,703 r = 0,838 |
y = 0,1625 + 0,9006 |
|
N, % |
R2 = 0,61 r = 0,785 |
y = 0,0009x + 0,279 |
В данном случае зависимости показателей имели вид линейной функции.
Коэффициенты корреляции были существенными, что позволяет сопоставлять показатели прибора N-тестера SPAD502 с содержанием общего хлорофилла и валового азота в растениях пшеницы. В период максимального потребления элементов питания сельскохозяйственных культур N-тестер SPAD502 дает возможность получить данные как о состоянии растения, так и выявить неоднородность по полю, что позволяет с большой вероятностью диагностировать уровень азотного питания с помощью портативного прибора, не прибегая к химическим методам.
Заключение. Результаты исследования показывают возможность применения фотометрического метода как инструмента оперативной диагностики азотного питания растений. Экспериментально установленная сопряженность показателей портативного прибора с лабораторными показателями содержания хлорофилла и азота в растениях может быть использована при корректировке и интерпретации данных N-тестера SPAD-502 при мониторинге состояния посевов, оценке его качественных и количественных показателей, а также для принятия решений о необходимости внекорневых подкормок и расчета доз азотных удобрений. Использование данного прибора может заменить более трудоемкие и дорогостоящие методы химической диагностики.
1. Ренев Е.П., Еремин Д.И. Внутрипольная и временная вариабельность нитратного азота на полях Западной Сибири // Вестник КрасГАУ. 2021. № 12. С. 116–124.
2. Власенко О.А. Режим питания растений в агрочерноземах в зависимости от приемов основной обработки // Вестник КрасГАУ. 2020. № 6. С. 11–19.
3. Гамзиков Г.П. Агрохимия азота в агроценозах. Новосибирск: РАСХН, Сиб. отд-ние, 2013. 790 с.
4. Шпедт А.А., Трубников Ю.Н. Оценка производительной способности и изменение свойств черноземов Красноярского края // Агрохимия. 2020. № 10. С. 9–14.
5. Сравнение показаний прибора, измеряющего хлорофилл, и содержания хлорофилла в листьях Amaranthus vlitus: корреляция с физиологическими процессами / Г. Капотис [и др.] // Физиология растений. 2003. Т. 50, № 3. С. 442–444.
6. К вопросу разработки недеструктивных методов диагностики минерального питания яблони с использованием способа спектрометрии отраженного света / А.И. Кузин [и др.] // Плодоводство и ягодоводство России. 2018. Т. 53. С. 157–162.
7. Использование прибора N-тестер «Яра» для диагностики азотного питания озимой пшеницы / Ю.Ф. Осипов [и др.] // Плодородие 2011. № 11. С. 26–29.
8. Evaluating the relationship between leaf chlorophyll concentration and SPAD-502 chlorophyll meter readings / J. Uddling [et al.] // Photosynthesis research. 2007. Vol. 91, № 1. P. 37–46.
9. Xu W., Rosenow D.T., Nguyen H.T. Stay green trait in grain sorghum: relationship between visual rating and leaf chlorophyll concentration // Plant Breeding. 2000. Vol. 119, № 4. P. 365–367.
10. Assessing foliar chlorophyll contents with the SPAD-502 chlorophyll meter: a calibration test with thirteen tree species of tropical rainforest in French Guiana / S. Coste [et al.] // Annals of Forest Science. 2010. Vol. 67, № 6. P. 607–607.
11. Marenco R.A., Antezana-Vera S.A., Nascimento H.C.S. Relationship between specific leaf area, leaf thickness, leaf water content and SPAD-502 readings in six Amazonian tree species // Photosynthetica. 2009. Vol. 47, № 2. P. 184–190.
12. SPAD chlorophyll meter reading can be pronouncedly affected by chloroplast movement / J. Nauš [et al.] // Photosynthesis Research. 2010. Vol. 105, № 3. P. 265–271.
13. Monje O. A., Bugbee B. Inherent limitations of nondestructive chlorophyll meters: a comparison of two types of meters // HortScience. 1992. Vol. 27, № 1. P. 69–71.
14. Пат. RU 2244916. Способ определения хлорофилла в растениях гречихи / Лобков В.Т., Наполова Г.В.; патентообладатель Орловский гос. аграр. ун-т. № 2003120313/04; заявл. 02.07.2003; опубл. 20.01.2005, Бюл. № 2.
15. Методики агрохимических исследований почв и растений: учебно-практическое пособие / В.Н. Дышко [и др.]. Смоленск: Смоленская ГСХА, 2014. 197 с.
16. Ермохин Ю.И. Основы прикладной агрохимии: учеб. пособие. Омск: Вариант-Сибирь, 2004. 117 с.
17. Веретенников А.В. Физиология растений: учебник. М.: Академический Проект, 2006. 480 с.
